Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401128

概要

PRSS1は、トリプシノーゲンとして合成されて分泌されるセリンプロテアーゼであるトリプシン-1をコードしています。トリプシン-1は消化管内で活性化され、ペプチド基質を切断してプロテオリティック・カスケード（タンパク質分解カスケード）を開始します。その活性は消化酵素の活性化に寄与するだけでなく、細胞外でのタンパク質分解も調節し得るため、上皮バリア機能や炎症シグナル伝達に下流の影響を及ぼします。トリプシン-1の活性化異常およびPRSS1のバリアントは、ザイモーゲンの早期活性化、腺房細胞のストレス応答、組織傷害の機序などを含む膵炎の病態生物学と関連しています。そのためPRSS1は、膵臓および消化管の研究モデルにおいて、プロテアーゼ駆動性経路や遺伝子型から表現型への関係を解析するための有用な切り口となります。

Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPRSS1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PRSS1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PRSS1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Trypsin-1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Trypsin-1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PRSS1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Trypsin-1の機能に不可欠なPRSS1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PRSS1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTrypsin-1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PRSS1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Trypsin-1 HDRプラスミド（h）および Trypsin-1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPRSS1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPRSS1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。