TrxR1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400994-ACT

TXNRD1 kodiert die Thioredoxin-Reduktase 1 (TrxR1), ein zytosolisches Selenoenzym, das Thioredoxin in seinem reduzierten Zustand hält und so die zelluläre Redoxhomöostase unterstützt. Über das Thioredoxin-System beeinflusst TrxR1 die DNA-Synthese und -Reparatur, das Gleichgewicht von Protein-Thiol- und Disulfidbindungen sowie die Reaktionen auf oxidativen und elektrophilen Stress und ist in Signalwege eingebunden, die Apoptose, Proliferation und inflammatorische Signalgebung regulieren. Die TXNRD1-Aktivität steht in Wechselwirkung mit Glutathion- und NADPH-abhängigen antioxidativen Netzwerken und moduliert redoxsensitive Transkriptionsprogramme. Eine dysregulierte Expression von TXNRD1/TrxR1 und Redoxanpassung werden häufig in Kontexten wie Krebsstoffwechsel, Neurodegeneration sowie kardiovaskulärer und inflammatorischer Stressbiologie untersucht.

TrxR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TXNRD1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TrxR1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TXNRD1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TXNRD1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TrxR1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TXNRD1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TrxR1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TrxR1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TXNRD1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.