TRPV3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-417690-ACT

TRPV3は、一過性受容体電位（TRP）バニロイドファミリーに属する、熱および化学物質に感受性をもつ非選択性陽イオンチャネルをコードしており、上皮および感覚系の文脈でCa2+流入を制御します。チャネルの活性化は膜興奮性や、その下流にあるCa2+依存性シグナル伝達経路に影響を及ぼし、角化細胞の分化、バリア恒常性、ならびに神経—上皮間コミュニケーションに関与します。TRPV3活性は、細胞内カルシウム動態およびセカンドメッセンジャー・カスケードの調節を介して、炎症性および掻痒（そうよう）受容性のシグナルネットワークとも交差します。TRPV3の発現や機能の変化は、皮膚バリア機能障害の表現型や慢性掻痒に関連する生物学と関連づけられており、表皮および感覚経路研究における機序解明の標的として有用であることが示唆されています。

TRPV3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRPV3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRPV3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRPV3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRPV3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRPV3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRPV3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRPV3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRPV3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRPV3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。