TRPC5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-423516
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- TRPC5 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico TRPC5, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:TRPC5 Anticorpo (1C8): sc-293259
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
TRPC5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-423516 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Trpc5 codifica o TRPC5, um canal de cátions não seletivo da família dos canais TRP canónicos (transient receptor potential canonical) que medeia o influxo de Ca²⁺ em resposta a sinalização dependente de recetores e de lípidos. O TRPC5 participa em vias dependentes de PLC a jusante de GPCRs e de recetores tirosina-quinase, modulando a excitabilidade da membrana, a homeostase do cálcio intracelular e programas de transcrição dependentes de cálcio. Em sistemas murinos, o TRPC5 é amplamente estudado em neurónios e em contextos vasculares/endoteliais, onde influencia a função sináptica, a dinâmica de neuritos, respostas mecanossensíveis e sinalização sensível ao estado redox. A atividade desregulada do TRPC5 tem sido associada a processos relevantes para a sinalização da dor, comportamentos do tipo ansioso, remodelação vascular e mecanismos de lesão renal, sustentando a sua utilização em modelos de neurobiologia, biologia cardiovascular e fisiopatologia renal.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO TRPC5 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Trpc5 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Trpc5, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Trpc5 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína TRPC5.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Trpc5 para a investigação da sinalização de TRPC5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Trpc5 críticos para a função TRPC5
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Trpc5 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo TRPC5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo TRPC5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Trpc5. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo TRPC5 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR TRPC5 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Trpc5 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Trpc5 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.