Troponin T-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-400949

概要

TNNT2は心筋トロポニンTをコードしており、これは横紋筋においてCa²⁺シグナルをアクチン–ミオシン相互作用の薄フィラメント制御へと結び付けるトロポニン複合体の中核構成要素である。TNNT2はトロポニン複合体をトロポミオシンに固定することで、心筋細胞内のサルコメア収縮ダイナミクス、筋原線維の組織化、ならびに興奮収縮連関の協調に寄与する。TNNT2の遺伝的変異や発現の破綻は遺伝性心筋症や収縮機能障害と関連しており、ヒト心筋細胞におけるサルコメア生物学、カルシウム制御ネットワーク、ストレス応答経路を研究する上で重要な分子学的な入口となる。そのためTNNT2は、疾患関連リモデリングのモデル化、筋フィラメントの感受性評価、ならびにin vitroにおける心筋細胞成熟度のベンチマークとして広く用いられている。

Troponin T-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTNNT2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TNNT2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TNNT2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Troponin T-Cタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Troponin T-Cシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TNNT2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Troponin T-Cの機能に不可欠なTNNT2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TNNT2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Troponin T-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTroponin T-C CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TNNT2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Troponin T-C HDRプラスミド（h）および Troponin T-C HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTNNT2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTNNT2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。