Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-423457

概要

Tnni1は、Ca²⁺依存的にアクチン‐ミオシン相互作用を制御するトロポニン複合体の抑制性サブユニットである、遅筋型骨格筋トロポニンIアイソフォーム（Troponin I-SS）をコードします。トロポニンC、トロポニンT、トロポミオシンとの相互作用を介して薄フィラメントのCa²⁺応答性を調節することで、Troponin I-SSは酸化的な遅筋線維（スロー・ツイッチ線維）における収縮の速度特性と弛緩特性の設定に寄与します。Tnni1の発現とアイソフォーム切り替えは、筋線維の成熟、神経筋活動、ならびに筋のパフォーマンスと持久力を形作る代謝適応経路と密接に関連しています。トロポニン複合体の組成異常やサルコメアのCa²⁺制御異常は、筋力低下、ミオパチー、加齢や不動化に伴うリモデリングの研究において重要であり、収縮調節の変化が機能低下に寄与します。

Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTnni1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tnni1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tnni1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Troponin I-SSタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Troponin I-SSシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tnni1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Troponin I-SSの機能に不可欠なTnni1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tnni1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Troponin I-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTroponin I-SS CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tnni1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Troponin I-SS HDRプラスミド（m）および Troponin I-SS HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTnni1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTnni1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。