TRMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410018

概要

TRMT1はtRNAメチルトランスフェラーゼ1をコードしており、複数の細胞質tRNAの26位におけるN2,N2-ジメチルグアノシン（m2,2G）形成を触媒するRNA修飾酵素です。この修飾は、tRNAの適切なフォールディングとデコードの正確性を支え、その結果として全体的な翻訳効率とプロテオスタシスに影響を与えます。TRMT1活性は、RNAのエピトランスクリプトーム制御と細胞ストレス応答を結び付け、増殖や分化の過程におけるタンパク質合成プログラムに下流の影響を及ぼします。TRMT1機能の変化は神経発達に関連する表現型と関連付けられており、tRNA修飾ダイナミクスが神経系およびストレス適応的な遺伝子発現をどのように形作るかを解析する上で有用な標的となります。

TRMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるTRMT1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、TRMT1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、TRMT1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TRMT1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TRMT1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、TRMT1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TRMT1の機能に不可欠なTRMT1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、TRMT1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TRMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTRMT1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、TRMT1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TRMT1 HDRプラスミド（h）および TRMT1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTRMT1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTRMT1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。