TrkB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421983
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- TrkB El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico TrkB, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: TrkB Anticuerpo (F-1): sc-377218
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
TrkB Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421983 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ntrk2 codifica la tirosina quinasa receptora TrkB, un receptor de alta afinidad para BDNF y NT-4/5 que regula la supervivencia neuronal, la diferenciación y la plasticidad sináptica. Tras la unión del ligando, TrkB activa las cascadas canónicas de señalización PI3K–AKT, MAPK/ERK y PLCγ–Ca²⁺, que conectan señales extracelulares de neurotrofinas con programas transcripcionales y del citoesqueleto. La señalización dependiente de TrkB influye en el crecimiento de neuritas, la remodelación de espinas dendríticas y el refinamiento de circuitos dependiente de la actividad en el sistema nervioso en desarrollo y en el adulto. La alteración de la actividad de la vía Ntrk2/TrkB se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como con procesos neurodegenerativos, lo que respalda su amplia relevancia en modelos de enfermedad centrados en mecanismos.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO TrkB (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ntrk2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ntrk2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ntrk2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TrkB.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ntrk2 para la investigación de la señalización de TrkB, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ntrk2 críticos para la función de TrkB
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ntrk2 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido TrkB CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido TrkB CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ntrk2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TrkB (m) y el plásmido HDR TrkB (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ntrk2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ntrk2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.