TrkB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421983

概要

Ntrk2は受容体型チロシンキナーゼTrkBをコードしており、TrkBはBDNFおよびNT-4/5に対する高親和性受容体として、神経細胞の生存、分化、ならびにシナプス可塑性を制御します。リガンド結合によりTrkBは、細胞外のニューロトロフィン刺激を転写・細胞骨格プログラムへと結び付ける、典型的なPI3K–AKT、MAPK/ERK、PLCγ–Ca²⁺のシグナル伝達カスケードを活性化します。TrkB依存的シグナルは、発生期および成体の神経系において、神経突起伸長、樹状突起スパインのリモデリング、活動依存的な回路の洗練化に影響します。Ntrk2/TrkB経路活性の変化は、神経発達および神経精神疾患様の表現型に加え、神経変性過程とも関連づけられており、機序に焦点を当てた疾患モデルにおける幅広い重要性が示されています。

TrkB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるNtrk2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ntrk2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ntrk2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TrkBタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TrkBシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ntrk2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TrkBの機能に不可欠なNtrk2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ntrk2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TrkB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTrkB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ntrk2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TrkB HDRプラスミド（m）および TrkB HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはNtrk2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のNtrk2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。