Trk C CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400854-ACT

NTRK3 は受容体型チロシンキナーゼ Trk C をコードしており、主にニューロトロフィン3に応答する高親和性ニューロトロフィン受容体として、神経細胞の分化、生存、シナプス可塑性を制御します。リガンド結合により Trk C は MAPK/ERK、PI3K/AKT、PLCγ 経路を介した典型的な受容体型チロシンキナーゼシグナルを活性化し、転写プログラムと細胞骨格リモデリングを協調的に制御します。神経発生および神経回路の維持における役割に加え、NTRK3 シグナルの異常や遺伝子再構成は、複数の腫瘍コンテキストにおいて、増殖因子シグナルの変調、系譜指定の異常、ならびに腫瘍化経路の活性化と関連づけられています。これらの特性により、Trk C はニューロトロフィン生物学、受容体トラフィッキング、そして細胞運命決定に影響する経路間クロストークを研究するうえで有用な結節点となります。

Trk C CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性NTRK3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Trk C CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における NTRK3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はNTRK3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Trk Cの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のNTRK3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTrk C依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびNTRK3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTrk C経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。