TRIM8 Lentiviral Activation Particles (m): sc-429995-LAC

Trim8 kodiert TRIM8, eine E3-Ubiquitin-Ligase der TRIM-Familie, die über Ubiquitinierung die Proteinstabilität und die Stärke von Signalwegen reguliert und dadurch Transkriptionsprogramme beeinflusst, die mit angeborener Immunität und zellulären Stressantworten verknüpft sind. TRIM8 moduliert zytokingetriebene Signalwege, darunter NF-κB- und interferonassoziierte Signale, und wurde – kontextabhängig – mit der Kontrolle der Aktivität und des Umsatzes zentraler Regulatoren wie p53 und STAT-Proteinen in Verbindung gebracht. In Mausmodellen wird TRIM8 aufgrund seiner Rollen in der Neuroentwicklung, Entzündung und zellulären Homöostase untersucht; veränderte Expression kann dabei Immun-Signalwege und Netzwerke der Wachstumskontrolle umformen. Diese Eigenschaften machen Trim8 zu einem nützlichen Knotenpunkt, um ubiquitinabhängige Regulation von Signalnetzwerken in krankheitsrelevanten Modellen zu analysieren.

TRIM8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Trim8-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

TRIM8 Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Trim8-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen TRIM8-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Trim8-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.