Triadin Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-429407-NIC

Trdn codifica a triadina, uma proteína de membrana juncional do retículo sarcoplasmático que organiza o acoplamento excitação–contração no músculo estriado ao ligar o complexo do receptor de rianodina a proteínas luminais ligadoras de Ca²⁺, como a calsequestrina. Em cardiomiócitos e miofibras esqueléticas de camundongo, a triadina ajuda a ajustar a cinética de liberação e de recaptura intracelular de Ca²⁺, que molda a força contrátil, o período refratário e a sinalização de homeostase de Ca²⁺. Por meio do seu papel na arquitetura de microdomínios do retículo sarcoplasmático, a triadina influencia vias dependentes de Ca²⁺ que regulam o desenvolvimento muscular, respostas ao estresse e a estabilidade eletrofisiológica. A disfunção de TRDN está associada a fenótipos hereditários de arritmia e a características miopáticas, tornando Trdn um alvo relevante para modelar defeitos no manuseio de Ca²⁺ e o remodelamento do retículo sarcoplasmático.

Triadin O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Trdn em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Trdn. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Trdn. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Trdn interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.