TREM-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-429903-ACT

O gene Trem2 de camundongo codifica o TREM-2, um imunorreceptor enriquecido em micróglias e em outras células da linhagem mieloide, que dá suporte à sobrevivência, quimiotaxia e depuração fagocítica de lipídios e de detritos celulares. Por meio de sinalização mediada por adaptadores (principalmente via TYROBP/DAP12), ele aciona vias a jusante dependentes de SYK, que moldam o tônus inflamatório, a detecção de lipídios e a reprogramação metabólica. A atividade do TREM-2 modula as transições de estado da micróglia durante dano tecidual e remodelamento e é amplamente estudada em neuroinflamação e neurodegeneração, bem como na biologia de macrófagos em tecidos periféricos. Alterações na sinalização de TREM-2 têm sido associadas a respostas imunes inatas desreguladas, depuração prejudicada de detritos e mudanças em programas transcricionais de micróglia relevantes para doenças.

TREM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Trem2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TREM-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Trem2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Trem2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TREM-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Trem2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TREM-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TREM-2 em células tumorais com expressão de Trem2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.