TRAPPC10 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406491

Panoramica

TRAPPC10 codifica una subunità centrale del complesso TRAPP (transport protein particle), che supporta l’ancoraggio delle vescicole e il traffico di membrana lungo la via secretoria precoce e il sistema endomembranoso. Grazie al suo ruolo nel coordinare il trasporto vescicolare e le fasi di traffico associate a Golgi e reticolo endoplasmatico (RE), TRAPPC10 contribuisce allo smistamento intracellulare delle proteine, all’omeostasi degli organelli e alla consegna del carico necessaria per la normale fisiologia cellulare. L’alterazione dei componenti del complesso TRAPP può perturbare il flusso della via secretoria e le risposte allo stress, rendendo TRAPPC10 rilevante per studi meccanicistici sulla segnalazione dipendente dal traffico e sui programmi di mantenimento cellulare. Un trasporto vescicolare alterato è inoltre implicato in fenotipi neuroevolutivi e neurodegenerativi, collocando TRAPPC10 come un bersaglio utile per modellare, in cellule umane, i meccanismi di malattia legati al traffico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TRAPPC10 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene TRAPPC10 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del TRAPPC10 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto TRAPPC10 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TRAPPC10.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di TRAPPC10 per lo studio della segnalazione di TRAPPC10, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni TRAPPC10 critici per la funzione di TRAPPC10
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di TRAPPC10 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TRAPPC10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal TRAPPC10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus TRAPPC10. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TRAPPC10 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR TRAPPC10 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia TRAPPC10 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio TRAPPC10 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.