TRAF6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400117-ACT

TRAF6 (fator associado ao recetor de TNF 6) é uma ligase E3 de ubiquitina do tipo RING e uma proteína adaptadora que transduz sinais de membros da superfamília de recetores de TNF e de recetores Toll-like/IL-1. Por meio de poliubiquitinação ligada a K63 de si própria e de proteínas parceiras, a TRAF6 promove a ativação de TAK1 e, a jusante, das vias NF-κB e MAPK, moldando a expressão de genes inflamatórios, as respostas imunitárias inatas e programas de sobrevivência celular. A TRAF6 também interage com a sinalização PI3K–AKT e contribui para a diferenciação de osteoclastos via sinalização RANK–RANKL, ligando a regulação imunitária à remodelação óssea. A desregulação da sinalização de TRAF6 tem sido associada a inflamação crónica, disfunção imunitária e ativação de vias oncogénicas em múltiplos contextos tumorais, sustentando a sua utilização como nó mecanístico em estudos focados em vias.

TRAF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TRAF6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TRAF6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TRAF6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TRAF6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TRAF6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TRAF6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TRAF6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TRAF6 em células tumorais com expressão de TRAF6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.