TRAF3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400473-ACT

TRAF3（TNF受容体関連因子3）は、細胞質に存在するアダプター分子であり、E3ユビキチンリガーゼでもあります。TNF受容体スーパーファミリー、Toll様受容体、RIG-I様受容体の各メンバーからのシグナルを下流の炎症・抗ウイルスプログラムへと連結します。TRAF3は、ユビキチン依存的な受容体近傍複合体の組み立てを制御することで、I型インターフェロン誘導やNF-κBおよびMAPK経路の出力を司る主要なシグナル伝達ノードを調節します。免疫細胞においてTRAF3は、自然免疫と獲得免疫のバランス維持に寄与し、B細胞の恒常性、サイトカイン産生、病原体認識に影響を与えます。TRAF3の活性や発現の変化は免疫調節異常や炎症関連の表現型と関連づけられており、腫瘍性シグナル伝達や血液悪性腫瘍の生物学という文脈で頻繁に研究されています。

TRAF3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TRAF3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TRAF3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TRAF3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTRAF3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TRAF3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTRAF3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTRAF3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTRAF3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTRAF3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。