Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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TRAF2 Double Nickase Plasmid (m): sc-423493-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TRAF2 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TRAF2 Double-Nickase-Plasmid (m) und TRAF2 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Traf2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TRAF2: sc-136999
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TRAF2 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423493-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TRAF2 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423493-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Traf2 kodiert TRAF2, ein Adapterprotein und eine E3-Ubiquitin-Ligase, die die Signalübertragung der TNF-Rezeptor-Superfamilie mit der nachgeschalteten Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege koppelt und dadurch Transkriptionsprogramme formt, die Entzündung, Zellüberleben und Stressantworten steuern. Über Interaktionen mit cIAPs, RIPK1 und upstream gelegenen Rezeptoren wie TNFR und CD40 moduliert TRAF2 K63-verknüpfte Ubiquitinierung sowie den Aufbau von Signalkomplexen, die Zytokinoutput und die Entscheidung zwischen Apoptose und pro-survival-Signalen bestimmen. Die Traf2-Aktivität ist außerdem mit der Regulation des nichtkanonischen NF-κB-Wegs verknüpft, indem sie die Stabilität von NIK kontrolliert, was die B-Zell-Biologie und die Immunhomöostase beeinflusst. Eine fehlregulierte TRAF2-Signalgebung wurde mit immunvermittelter Pathologie und onkogenen Signalkontexten in Verbindung gebracht, wodurch Traf2 einen häufigen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu rezeptorgetriebener Entzündung und Überlebenssignalgebung darstellt.
TRAF2 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Traf2-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Traf2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Traf2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Traf2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.