TRAF2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-423493-NIC

O gene Traf2 de camundongo codifica a TRAF2, uma proteína adaptadora e ligase de ubiquitina E3 que conecta a sinalização da superfamília de receptores de TNF à ativação downstream das vias NF-κB e MAPK, moldando programas transcricionais que governam inflamação, sobrevivência celular e respostas ao estresse. Por meio de interações com cIAPs, RIPK1 e receptores a montante como TNFR e CD40, a TRAF2 modula a ubiquitinação ligada a K63 e a montagem de complexos de sinalização que determinam a produção de citocinas e a decisão entre apoptose e sobrevivência. A atividade de Traf2 também está associada à regulação da NF-κB não canônica por meio do controle da estabilidade de NIK, influenciando a biologia de células B e a homeostase imune. A sinalização de TRAF2 desregulada tem sido implicada em patologias imunomediadas e em contextos de sinalização oncogênica, tornando Traf2 um nó comum para estudos mecanísticos de inflamação e sinalização de sobrevivência acionadas por receptores.

TRAF2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Traf2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Traf2. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Traf2. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Traf2 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.