tPA Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400922-ACT

O gene humano **PLAT** codifica o ativador do plasminogénio do tipo tecidular (**tPA**), uma serina protease secretada que converte o plasminogénio em plasmina para regular a fibrinólise e a proteólise da matriz extracelular. Por meio da geração de plasmina, o tPA influencia a remodelação pericelular, a migração celular e a homeostase vascular, interagindo com vias que controlam o equilíbrio da coagulação e a sinalização ativada por proteases. A expressão de **PLAT** é rigidamente controlada em células endoteliais e noutros tipos celulares, e a desregulação do sistema de ativação do plasminogénio tem sido associada a fenótipos trombóticos e hemorrágicos, lesão neurovascular e remodelação do microambiente tumoral. Estas características fazem do **PLAT** um alvo útil para estudar redes de proteases, biologia vascular e proteólise extracelular dependente do contexto.

tPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de PLAT sem alterar a sequência de ADN subjacente.

tPA O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus PLAT em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição PLAT, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de tPA. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus PLAT nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de tPA no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via tPA em células tumorais com expressão de PLAT silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.