Tom70 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402022-NIC

TOMM70 codifica a Tom70, um recetor de importação na membrana externa mitocondrial que reconhece pré-proteínas citosólicas e transportadores hidrofóbicos associados a chaperonas, coordenando a sua entrega ao complexo TOM para translocação para o interior das mitocôndrias. Ao sustentar a biogénese de componentes da cadeia respiratória e a proteostase mitocondrial, a Tom70 contribui para a capacidade de fosforilação oxidativa, a dinâmica do organelo e a adaptação ao stress celular. Alterações na função de TOMM70 têm sido estudadas em contextos de disfunção mitocondrial e neurodegeneração, e podem influenciar a sinalização imunitária inata nas mitocôndrias ao modular a disponibilidade e a organização de fatores importados que interagem com vias antivirais dependentes de MAVS. Estas características tornam o TOMM70 um alvo útil para investigar a importação de proteínas mitocondriais, a remodelação metabólica e os circuitos de resposta ao stress relevantes para fenótipos de doenças complexas.

Tom70 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus TOMM70 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de TOMM70. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função TOMM70. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com TOMM70 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.