Tom20 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400041

Descripción general

TOMM20 codifica Tom20, un receptor central del complejo translocasa de la membrana externa mitocondrial (TOM) que reconoce secuencias N‑terminales de direccionamiento mitocondrial e inicia la importación a las mitocondrias de proteínas codificadas en el núcleo. Al regular la biogénesis de proteínas mitocondriales, Tom20 influye en la fosforilación oxidativa, la dinámica mitocondrial, la mitofagia y las vías de señalización de estrés que determinan el metabolismo y la supervivencia celular. La alteración de la expresión de TOMM20 o de la eficiencia de importación mitocondrial se ha vinculado con la disfunción mitocondrial observada en la neurodegeneración, los trastornos cardiometabólicos y la remodelación metabólica asociada al cáncer. Por ello, Tom20 se utiliza ampliamente como un nodo funcional para estudiar la homeostasis mitocondrial, la proteostasis y la comunicación entre orgánulos y el núcleo.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Tom20 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen TOMM20 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del TOMM20 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de TOMM20 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Tom20.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en TOMM20 para la investigación de la señalización de Tom20, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de TOMM20 críticos para la función de Tom20
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de TOMM20 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Tom20 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Tom20 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus TOMM20. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Tom20 (h) y el plásmido HDR Tom20 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología TOMM20 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana TOMM20 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.