TMPRSS4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-416288-ACT

TMPRSS4（transmembrane serine protease 4）は、細胞表面に発現するII型膜貫通型セリンプロテアーゼであり、細胞周囲でのプロテオリシス、細胞外マトリックス（ECM）のリモデリング、ならびに上皮細胞の挙動を調節し得ます。プロテアーゼ活性化シグナル伝達や、細胞—細胞／細胞—マトリックス相互作用に影響を与えることで、TMPRSS4は遊走、浸潤、上皮間葉転換（EMT）といった過程に関与することが示されています。TMPRSS4発現の変化は複数の固形腫瘍で報告されており、しばしば攻撃的な表現型や転移能と関連するため、浸潤関連プログラムの作用機序研究における有用な標的となります。さらにTMPRSS4は、上皮組織において受容体のプロセシングや下流シグナルを制御する膜係留型プロテアーゼ・ネットワークの研究においても重要です。

TMPRSS4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TMPRSS4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TMPRSS4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TMPRSS4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTMPRSS4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TMPRSS4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTMPRSS4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTMPRSS4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTMPRSS4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTMPRSS4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。