TMEM55B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410227-ACT

TMEM55B codifica uma fosfatase transmembranar de fosfoinositídeos implicada na regulação da sinalização de fosfatidilinositol, ao catalisar a desfosforilação de substratos fosfoinositídeos, influenciando assim a identidade e o tráfego de membranas. Por meio da modulação da composição lipídica das membranas endossomais e lisossomais, TMEM55B está ligada ao transporte vesicular, à renovação (turnover) de receptores e ao controle mais amplo da dinâmica de sinalização intracelular. A homeostase alterada de fosfoinositídeos está associada à desregulação do crescimento celular e das respostas ao estresse, tornando TMEM55B relevante para estudos de crosstalk entre vias que podem impactar fenótipos de proliferação e sobrevivência. Em sistemas de células humanas, a expressão e a atividade de TMEM55B oferecem um ponto de partida útil para investigar a regulação, dirigida por lipídios, da função de organelas e de redes de sinalização em contextos relevantes para doenças.

TMEM55B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TMEM55B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TMEM55B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TMEM55B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TMEM55B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TMEM55B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TMEM55B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TMEM55B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TMEM55B em células tumorais com expressão de TMEM55B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.