TMEM173 Double Nickaseプラスミド (h): sc-403148-NIC

TMEM173は、細胞質DNAの感知を自然免疫シグナル伝達へと結び付ける、小胞体（ER）局在のアダプターであるSTINGをコードします。cGASの下流で産生される環状ジヌクレオチドによって活性化されると、STINGはゴルジ体へ移行し、TBK1依存的なIRF3のリン酸化およびNF-κBの活性化を開始して、I型インターフェロンと炎症性遺伝子プログラムを駆動します。この経路は、抗微生物防御、抗原提示、免疫代謝のリモデリングを協調的に制御し、その破綻は自己炎症性表現型、インターフェロン病、ならびに腫瘍と免疫の相互作用に関連します。そのためTMEM173は、DNA損傷に伴う炎症、ウイルス制限、自然免疫と獲得免疫応答のクロストークを制御する経路において広く研究されています。

TMEM173 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TMEM173 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TMEM173内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TMEM173の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TMEM173が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。