Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
TMEM173 Double Nickase Plasmid (h): sc-403148-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TMEM173 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TMEM173 Double-Nickase-Plasmid (h) und TMEM173 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf TMEM173 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: TMEM173: sc-518172
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TMEM173 Double Nickase Plasmid (h) | sc-403148-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
TMEM173 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403148-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
TMEM173 kodiert STING, ein im endoplasmatischen Retikulum lokalisiertes Adapterprotein, das die Erkennung zytosolischer DNA mit der angeborenen Immun-Signalübertragung verknüpft. Nach Aktivierung durch zyklische Dinukleotide, die nachgeschaltet von cGAS gebildet werden, wird STING zum Golgi transportiert und initiiert eine TBK1-abhängige Phosphorylierung von IRF3 sowie die Aktivierung von NF-κB, wodurch Programme der Typ-I-Interferonantwort und der Entzündungsgenexpression angestoßen werden. Diese Achse koordiniert die antimikrobielle Abwehr, die Antigenpräsentation und immunmetabolische Umprogrammierung; ihre Fehlregulation wird mit autoinflammatorischen Phänotypen, Interferonopathien und Wechselwirkungen zwischen Tumor und Immunsystem in Verbindung gebracht. TMEM173 wird daher intensiv in Signalwegen untersucht, die DNA-schadensassoziierte Entzündung, virale Restriktion und die Wechselwirkung der angeborenen Immunität mit adaptiven Antworten steuern.
TMEM173 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des TMEM173-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von TMEM173 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die TMEM173-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit TMEM173-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.