TLR8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401721-ACT

TLR8 umano (Toll-like receptor 8) è un recettore endosomiale di riconoscimento di pattern che rileva RNA a singolo filamento ricco di uridina proveniente da patogeni e da cellule danneggiate, avviando la segnalazione dell’immunità innata. Una volta attivato, TLR8 innesca cascate dipendenti da MyD88 che attivano programmi trascrizionali mediati da NF-κB e IRF, promuovendo l’espressione di citochine e chemochine infiammatorie e modulando la funzione delle cellule presentanti l’antigene. L’attività di TLR8 influenza le risposte di monociti/macrofagi e cellule dendritiche e si interseca con vie legate all’interferone e all’inflammasoma che coordinano la difesa antimicrobica. Una segnalazione di TLR8 disregolata è stata associata a stati infiammatori anomali e a meccanismi di malattie immuno-mediate, rendendolo un nodo utile per studiare la regolazione dell’immunità innata e le interazioni ospite–patogeno.

TLR8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TLR8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TLR8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TLR8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TLR8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TLR8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TLR8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TLR8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TLR8 nelle cellule tumorali con espressione di TLR8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.