TLR2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400267-NIC

TLR2はToll様受容体2（Toll-like receptor 2）をコードしており、細菌性リポタンパク質をはじめとする微生物由来リガンドを認識する、形質膜上のパターン認識受容体である。TLR2はしばしばTLR1またはTLR6とヘテロ二量体を形成して機能する。活性化されると、TLR2はMYD88およびTIRAP依存性経路を介してシグナル伝達を行い、NF-κBおよびMAPKカスケードを誘導することで、炎症性サイトカインやケモカインの転写を促進し、自然免疫から獲得免疫へのクロストークを形成する。さらにTLR2の活性は、貪食、オートファジー、インフラマソーム関連プログラムとも連動し、抗菌応答や組織恒常性に影響を与える。TLR2シグナルの制御異常は慢性炎症状態や感染に伴う病態に関与するとされ、宿主—微生物相互作用および無菌性炎症研究における重要な標的として広く研究されている。

TLR2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TLR2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TLR2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TLR2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TLR2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。