Thrombin R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420264

Visão geral

F2r codifica o receptor de trombina (receptor ativado por protease-1, PAR1), um GPCR ativado por clivagem proteolítica dependente de trombina que expõe um ligante ancorado, iniciando sinalização intracelular pelas vias de Gαq, Gα12/13 e Gαi. Em células de camundongo, o receptor de trombina regula respostas plaquetárias e endoteliais, o tônus vascular, a função de barreira e a sinalização inflamatória por meio de MAPK/ERK, RhoA/ROCK, mobilização de Ca²⁺ via PLCβ e programas transcricionais associados ao NF-κB. A atividade de F2r integra a coagulação às respostas celulares à lesão tecidual e ao estresse hemostático, influenciando o diálogo cruzado trombo-inflamatório e o remodelamento vascular. A sinalização desregulada de PAR1 tem sido associada a modelos de trombose, aterosclerose, disfunção vascular associada à sepse e interações tumor–estroma no microambiente, tornando-o relevante para estudos mecanísticos da biologia de doenças vasculares e inflamatórias.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Thrombin R (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene F2r em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do F2r, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do F2r na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Thrombin R.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de F2r para a investigação da sinalização de Thrombin R, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) F2r críticos para a função Thrombin R
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos F2r para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Thrombin R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo Thrombin R Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus F2r. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Thrombin R Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR Thrombin R (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia F2r para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo F2r definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.