THP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423607

Panoramica

Umod codifica la proteina di Tamm–Horsfall (THP, uromodulina), la glicoproteina secreta più abbondante nelle urine dei mammiferi, prodotta dalle cellule epiteliali del tratto ascendente spesso dell’ansa di Henle e del tubulo distale precoce. La THP viene rilasciata nel lume tubulare, dove contribuisce all’omeostasi dell’epitelio, modula la gestione degli ioni tramite interazioni con processi di trasporto come il riassorbimento di NaCl dipendente da NKCC2 e aiuta a modellare le reti proteiche urinarie attraverso la formazione di polimeri. Attraverso effetti sulle risposte allo stress tubulare, sulla segnalazione dell’immunità innata e sui programmi di differenziazione epiteliale, l’attività di UMOD influenza la fisiologia renale e la suscettibilità al danno tubulointerstiziale. Alterazioni genetiche e funzionali di Umod sono associate a fenotipi di malattia renale, tra cui la nefropatia associata all’uromodulina, tratti legati all’iperuricemia e un aumento del rischio di malattia renale cronica, rendendolo un locus chiave per studi meccanicistici nei modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Umod in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Umod insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Umod a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina THP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Umod per lo studio della segnalazione di THP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Umod critici per la funzione di THP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Umod per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal THP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal THP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Umod. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal THP Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR THP (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Umod per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Umod definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.