Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
Não são dados CRISPR: a imagem ilustra a qualidade do anticorpo para visualizar os resultados da experiência CRISPR.
THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401238
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- THP O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico THP, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:THP Anticorpo (B-2): sc-271022
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401238 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
UMOD codifica a uromodulina (THP), uma glicoproteína altamente abundante produzida por células epiteliais do ramo ascendente espesso da alça de Henle e secretada na urina após processamento na via secretora. A THP contribui para a homeostase tubular por meio da formação de polímeros, da regulação de processos de transporte iônico e de interações com componentes do sistema imune e da matriz extracelular no trato urinário. Fenótipos celulares associados a UMOD incluem alterações no dobramento e no tráfego da proteína, estresse do retículo endoplasmático (RE) e disfunção tubular, refletindo sua sensibilidade à maturação e à liberação apical. Variações genéticas ou disfunção em UMOD estão associadas a doenças renais hereditárias e à suscetibilidade à doença renal crônica, tornando-o um locus útil para estudar a biologia do epitélio renal e as vias de proteostase.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO THP (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene UMOD em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do UMOD, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do UMOD na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína THP.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de UMOD para a investigação da sinalização de THP, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) UMOD críticos para a função THP
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos UMOD para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo THP Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus UMOD. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo THP Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR THP (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia UMOD para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo UMOD definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.