THP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401238

Panoramica

UMOD codifica l’uromodulina (THP), una glicoproteina altamente abbondante prodotta dalle cellule epiteliali del tratto ascendente spesso dell’ansa di Henle e secreta nelle urine dopo la processazione lungo la via secretoria. La THP contribuisce all’omeostasi tubulare tramite la formazione di polimeri, la regolazione dei processi di trasporto ionico e le interazioni con componenti immunitarie e della matrice extracellulare nelle vie urinarie. I fenotipi cellulari associati a UMOD includono alterazioni del ripiegamento/traffico proteico, stress del reticolo endoplasmatico (ER) e disfunzione del tubulo, a riflesso della sua sensibilità ai processi di maturazione e al rilascio apicale. La variazione genetica o la disfunzione di UMOD è associata a malattie renali ereditarie e alla suscettibilità alla malattia renale cronica, rendendolo un locus utile per studiare la biologia dell’epitelio renale e le vie di proteostasi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO THP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene UMOD in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del UMOD insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto UMOD a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina THP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di UMOD per lo studio della segnalazione di THP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni UMOD critici per la funzione di THP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di UMOD per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal THP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal THP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus UMOD. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal THP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR THP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia UMOD per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio UMOD definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.