THP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-401238

Übersicht

UMOD kodiert für Uromodulin (THP), ein sehr reichlich vorkommendes Glykoprotein, das von Epithelzellen des dicken aufsteigenden Astes der Henle-Schleife produziert und nach Verarbeitung im sekretorischen Weg in den Urin ausgeschieden wird. THP trägt zur Homöostase der Tubuli bei, indem es Polymere bildet, Ionentransportprozesse reguliert und mit Immun- sowie extrazellulären Matrixkomponenten im Harntrakt interagiert. Zu den zellulären Phänotypen, die mit UMOD in Verbindung stehen, gehören veränderte Proteinfaltung und -transport, ER-Stress sowie eine gestörte Tubulusfunktion, was die Empfindlichkeit gegenüber Reifung und apikaler Freisetzung widerspiegelt. Genetische Variation oder Funktionsstörungen von UMOD sind mit erblichen Nierenerkrankungen und einer erhöhten Anfälligkeit für chronische Nierenerkrankungen assoziiert, wodurch dieser Lokus sich gut eignet, um renale Epithelbiologie und Proteostase-Signalwege zu untersuchen.

Das THP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des UMOD-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des UMOD-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von UMOD nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die THP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von UMOD-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der THP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf UMOD-Exone abzielen, die für die THP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere UMOD-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom THP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom THP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des UMOD-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das THP HDR-Plasmid (h) und THP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von UMOD-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten UMOD-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.