THAP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405020-ACT

THAP1 codifica um fator de transcrição de ligação ao DNA contendo um domínio THAP, que regula programas de expressão gênica ligados ao controle do ciclo celular, à repressão transcricional associada à cromatina e à função neuronal. Foi relatado que o THAP1 interage com cofatores nucleares e influencia vias que governam proliferação, diferenciação e apoptose por meio da regulação, específica de promotor, de genes-alvo. No sistema nervoso, a atividade de THAP1 está implicada na manutenção da homeostase transcricional e da organização nuclear, e sua desregulação é associada a fenótipos de distonia hereditária. Como regulador transcricional, THAP1 constitui um ponto útil para estudar como a ligação ao DNA específica de sequência e o recrutamento de cofatores moldam redes gênicas a jusante.

THAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de THAP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

THAP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus THAP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição THAP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de THAP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus THAP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de THAP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via THAP1 em células tumorais com expressão de THAP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.