Plásmido Doble Nickase (h) TFIIH p89: sc-401124-NIC

ERCC3 codifica TFIIH p89 (XPB), una ATPasa dependiente de ADN y helicasa 3′→5′ esencial del complejo TFIIH, que acopla el inicio basal de la transcripción por la ARN polimerasa II con la reparación por escisión de nucleótidos. Al desenrollar el ADN del promotor y el ADN que contiene lesiones durante la NER acoplada a la transcripción y la NER del genoma global, TFIIH p89 ayuda a coordinar la integridad del genoma, la progresión del ciclo celular y las respuestas al daño inducido por radiación UV. La alteración de la función de ERCC3 perturba la homeostasis transcripcional y la capacidad de reparación del ADN, lo que vincula los defectos de ERCC3 con síndromes hereditarios de reparación del ADN como el xeroderma pigmentoso y la tricoti distrofia. Como componente de TFIIH, TFIIH p89 se estudia con frecuencia en mecanismos de regulación de la transcripción, estrés replicativo y vías de mutagénesis.

TFIIH p89 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ERCC3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ERCC3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ERCC3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ERCC3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.