TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405237

概要

GTF2F1 は、転写因子 IIF（TFIIF）の 74 kDa サブユニット（TFIIF RAP 74 とも呼ばれる）をコードしており、RNA ポリメラーゼ II による一般転写機構の中核を成す構成要素です。TFIIF は TFIIB や TFIIE とともに前初期複合体を安定化し、プロモータークリアランスを促進するとともに、転写伸長を調節し、転写と共転写的 RNA プロセシングの協調にも寄与します。これらの機能を通じて、GTF2F1 は全体的な遺伝子発現制御、細胞周期の進行、そして複製／転写ストレスへの応答に関与します。一般転写因子の制御異常や Pol II ダイナミクスの変化は、増殖プログラムの破綻やゲノム不安定性としばしば関連するため、GTF2F1 はがん生物学や転写関連疾患の表現型を機構的に研究するうえで有用な結節点となります。

TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGTF2F1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GTF2F1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GTF2F1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TFIIF RAP 74タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TFIIF RAP 74シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GTF2F1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TFIIF RAP 74の機能に不可欠なGTF2F1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GTF2F1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GTF2F1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TFIIF RAP 74 HDRプラスミド（h）および TFIIF RAP 74 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGTF2F1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGTF2F1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。