TFIIF RAP 74 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-405237

Descripción general

GTF2F1 codifica la subunidad de 74 kDa del factor de transcripción IIF (TFIIF), también conocida como TFIIF RAP 74, un componente central de la maquinaria general de transcripción de la ARN polimerasa II. TFIIF estabiliza el complejo de preiniciación junto con TFIIB y TFIIE, favorece el escape del promotor y modula la elongación de la transcripción, a la vez que ayuda a coordinar la transcripción con el procesamiento co-transcripcional del ARN. A través de estas actividades, GTF2F1 contribuye al control global de la expresión génica, la progresión del ciclo celular y las respuestas al estrés de replicación o transcripción. La regulación alterada de los factores generales de transcripción y de la dinámica de la Pol II se asocia con frecuencia a programas proliferativos desregulados e inestabilidad genómica, lo que convierte a GTF2F1 en un nodo útil para estudios mecanísticos en biología del cáncer y fenotipos de enfermedad vinculados a la transcripción.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO TFIIF RAP 74 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GTF2F1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GTF2F1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GTF2F1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína TFIIF RAP 74.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GTF2F1 para la investigación de la señalización de TFIIF RAP 74, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GTF2F1 críticos para la función de TFIIF RAP 74
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GTF2F1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido TFIIF RAP 74 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GTF2F1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR TFIIF RAP 74 (h) y el plásmido HDR TFIIF RAP 74 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GTF2F1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GTF2F1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.