TFIIB Double Nickaseプラスミド (h): sc-401174-NIC

ヒトのGTF2Bは転写因子IIB（TFIIB）をコードしており、RNAポリメラーゼII（Pol II）前初期化複合体の中核構成要素として、TATAボックス上のTBP/TFIIDとPol IIを橋渡しし、転写開始点の位置決めを助けます。TFIIBはプロモーター認識、転写開始、そして初期のプロモーターエスケープを支え、全体的なmRNA産生量や細胞状態の遷移に影響を与えます。Pol II依存性転写における中心的役割を通じて、TFIIB機能の攪乱は、増殖、分化、ストレス応答を制御する経路に影響し得ます。TFIIB依存的な開始ダイナミクスを調節する因子を含む一般転写機構の異常は、腫瘍性の転写プログラムや、遺伝子発現の変化によって駆動されるその他の疾患に関与すると示唆されています。

TFIIB ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における GTF2B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、GTF2B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、GTF2Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、GTF2Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。