TFEB 더블 틈내기효소 플라스미드 (m): sc-437332-NIC
- Target species: mouse
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- TFEB Double Nickase Plasmid (m) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- TFEB 더블 니케이스 플라스미드 (m) 및 TFEB 더블 니케이스 플라스미드 (m2)는 Tfeb을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
TFEB 더블 틈내기효소 플라스미드 (m) | sc-437332-NIC | 20 µg | $410.00 |
Mouse Tfeb는 CLEAR 유전자 네트워크를 조정함으로써 리소좀 생합성과 자가포식을 총괄적으로 조절하는 마스터 조절자인 basic helix–loop–helix leucine zipper 전사인자 TFEB를 암호화한다. TFEB 활성은 영양 및 스트레스 감지 경로에 의해 엄격하게 조절되며, 특히 mTORC1 의존적 인산화는 세포질 내 격리와 핵 내 이동의 균형에 영향을 주어 리소좀 기능, 자가포식 플럭스, 그리고 세포 내 제거 능력을 정밀하게 조정한다. 이러한 프로그램을 통해 TFEB는 단백질 항상성(proteostasis), 미토콘드리아 품질 관리, 선천면역 신호전달을 형성하며, 환경적 단서를 분해대사적 리모델링과 연결한다. TFEB 신호의 이상 조절은 리소좀 저장 질환형(lysosomal storage phenotype), 신경퇴행 관련 단백질 독성 스트레스, 대사 불균형, 그리고 스트레스에 대한 종양세포의 적응과 연관되어 왔으며, 따라서 Tfeb는 세포 항상성의 기전을 연구하는 데 핵심 표적이 된다.
TFEB 더블 니카제 플라스미드(m)는 mouse 세포주 내 Tfeb 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 Tfeb 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 Tfeb의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, Tfeb 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.