TET2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400545-ACT

ヒトTET2は、Fe(II)/2-オキソグルタル酸依存性ジオキシゲナーゼをコードしており、5-メチルシトシンを5-ヒドロキシメチルシトシンおよびその後続誘導体へと酸化することで、能動的および受動的なDNA脱メチル化を促進します。エンハンサーおよびプロモーターのメチル化状態を調節することにより、TET2は造血分化、自己複製、ならびに免疫細胞系譜の規定を制御する転写プログラムを形成します。TET2の機能は、クロマチン修飾因子や、酸化シトシン塩基のDNA修復関連プロセシングを含むエピジェネティック経路と統合されており、ゲノム全体のアクセシビリティと遺伝子発現の安定性に影響を与えます。TET2の異常制御や変異はクローン性造血や骨髄系悪性腫瘍の生物学としばしば関連しており、疾患関連細胞システムにおけるエピジェネティック・リモデリングの機構研究における重要な標的となっています。

TET2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TET2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TET2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TET2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTET2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TET2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTET2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTET2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTET2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTET2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。