TERT Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423341

Panoramica

Tert codifica la subunità catalitica della telomerasi (TERT), una trascrittasi inversa che estende le ripetizioni telomeriche per preservare le estremità dei cromosomi durante la replicazione del DNA. Mantenendo la lunghezza dei telomeri, TERT sostiene la capacità proliferativa a lungo termine e influenza la stabilità del genoma, la senescenza replicativa e le risposte cellulari allo stress. L’attività di TERT interseca le vie di segnalazione del danno al DNA e di protezione dei telomeri, inclusi l’incappucciamento delle estremità mediato dal complesso shelterin e la regolazione dei checkpoint. Una funzione telomerasica deregolata è rilevante per fenotipi associati all’invecchiamento, per la biologia delle cellule staminali e per modelli di tumorigenesi, in cui il mantenimento dei telomeri incide sull’instabilità cromosomica e sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO TERT (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tert in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tert insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tert a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina TERT.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tert per lo studio della segnalazione di TERT, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tert critici per la funzione di TERT
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tert per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal TERT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal TERT CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tert. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal TERT Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR TERT (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tert per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tert definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.