TEF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m2): sc-423329-KO-2

概要

Tead4は転写因子TEF-3をコードしており、TEA/ATTSドメインをもつDNA結合タンパク質として、YAP/TAZなどの共活性化因子と協調して、増殖・生存・細胞運命決定を制御する遺伝子プログラムを調節する。マウスの発生においてTEAD4は栄養外胚葉（trophectoderm）指定の主要な決定因子であり、Hippo経路に応答する転写を介して上皮組織化や系譜決定にも寄与する。TEF-3の活性は、機械的刺激（メカニカルキュー）や上流のキナーゼシグナルを統合し、成長制御および分化に関与する標的遺伝子の発現を調整する。TEADファミリーのシグナル伝達の破綻は、組織恒常性の異常や腫瘍性の転写プログラムと関連づけられており、そのためTead4は状況依存的な転写制御を研究する上で有用な結節点（ノード）となる。

TEF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）は、mouse細胞株におけるTead4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Tead4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Tead4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TEF-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TEF-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Tead4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TEF-3の機能に不可欠なTead4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Tead4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TEF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTEF-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Tead4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TEF-3 HDRプラスミド（m）および TEF-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTead4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTead4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。