TDAG8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-416613

概要

GPR65は、細胞外の酸性化を感知し、cAMP/PKA経路およびその下流の転写プログラムを介してシグナルを伝達する、プロトン感受性Gタンパク質共役受容体（GPCR）であるTDAG8をコードしています。TDAG8は免疫系および造血系の環境で高く発現しており、酸性の微小環境下で炎症応答、走化性、細胞生存を調節します。細胞外pHをGPCRシグナル伝達に結び付けることで、TDAG8は組織炎症や腫瘍関連アシドーシスに関与するストレス応答経路やサイトカインネットワークに影響を与えます。GPR65活性の変化は、免疫調節異常や微小環境に起因する表現型との関連で研究されており、GPCRおよびpHセンシング生物学における機序解明の要となる分子としての有用性が示唆されています。

TDAG8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるGPR65遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、GPR65内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、GPR65のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TDAG8タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TDAG8シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、GPR65欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TDAG8の機能に不可欠なGPR65エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、GPR65ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TDAG8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびTDAG8 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GPR65遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TDAG8 HDRプラスミド（h）および TDAG8 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはGPR65ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のGPR65標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。