TCP-1 α Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402699-ACT

TCP1 codifica a TCP-1 alfa, uma subunidade central do complexo citosólico de chaperonina contendo TCP1 (CCT/TRiC), que promove o dobramento e a estabilização de proteínas com topologias complexas, incluindo actina e tubulina. Ao regular a proteostase do citoesqueleto, o CCT sustenta a dinâmica de microtúbulos e de actina, a progressão do ciclo celular e processos de tráfego associados às redes de proteostase. A função de TCP-1 alfa se cruza com vias de resposta ao estresse e de controle de qualidade proteica, que determinam como as células lidam com clientes mal dobrados ou propensos à agregação. A atividade desregulada da chaperonina e alterações na expressão de TCP1 têm sido associadas a fenótipos relevantes para crescimento oncogênico, neurodegeneração e desequilíbrio de proteostase, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos.

TCP-1 α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TCP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TCP-1 α O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TCP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TCP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TCP-1 α. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TCP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TCP-1 α no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TCP-1 α em células tumorais com expressão de TCP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.