TCF-19 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404549-ACT

TCF19 (TCF-19) è un fattore di trascrizione nucleare implicato nella regolazione della progressione del ciclo cellulare e di programmi trascrizionali legati alla proliferazione, con un’attività riportata a livello delle regioni promotrici di geni coinvolti nella replicazione del DNA e nel controllo dei checkpoint. È espresso in contesti proliferativi ed è stato associato a vie che governano l’ingresso in fase S e la regolazione dell’espressione genica dipendente dalla cromatina. Un’alterazione dell’espressione di TCF19 è stata osservata in diversi contesti rilevanti per la malattia, incluse firme trascrittomiche tumorali e fenotipi correlati al sistema immunitario, suggerendo un ruolo nel controllo della crescita e nell’adattamento allo stress cellulare. Queste caratteristiche rendono TCF19 un bersaglio utile per analizzare le reti trascrizionali che coordinano proliferazione, mantenimento del genoma ed espressione genica specifica del contesto.

TCF-19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TCF19 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

TCF-19 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TCF19 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TCF19, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di TCF-19. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TCF19 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da TCF-19 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via TCF-19 nelle cellule tumorali con espressione di TCF19 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.