TC-PTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422509

概要

マウスのPtpn2は、T細胞タンパク質チロシンホスファターゼ（TC-PTP）をコードしており、サイトカインおよび増殖因子経路を抑制するために主要なシグナル伝達中間体を脱リン酸化する、受容体型ではないPTPです。TC-PTPはJAK/STATシグナルを負に制御し、インスリン受容体やEGFRに関連するリン酸化イベントも調節し得ることで、増殖・生存・免疫活性化を制御する転写プログラムを形成します。これらの機能を通じて、Ptpn2は免疫恒常性と上皮バリアの完全性維持に寄与し、その制御異常は実験モデルにおいて炎症性・自己免疫性の表現型や、腫瘍関連シグナルの変化と関連づけられています。そのためPtpn2は、サイトカイン応答性の機構、T細胞シグナルの閾値設定、炎症駆動性疾患の生物学を理解する上で広く研究されています。

TC-PTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるPtpn2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ptpn2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ptpn2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、TC-PTPタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、TC-PTPシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ptpn2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• TC-PTPの機能に不可欠なPtpn2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ptpn2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• TC-PTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTC-PTP CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ptpn2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  TC-PTP HDRプラスミド（m）および TC-PTP HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPtpn2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPtpn2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。