TBL3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411490-ACT

TBL3（transducin beta-like 3）は、主に核小体に局在する保存性の高いWDリピートタンパク質をコードしており、pre-rRNAのプロセシングや小リボソームサブユニットの成熟を含むリボソーム生合成を支えます。核小体のRNA–タンパク質複合体内で、組み立てと品質管理の各段階を協調させることで、TBL3は全体的な翻訳能や細胞増殖プログラムに影響を与えます。核小体機能やrRNAプロセシングの攪乱は、増殖ストレス状態に共通してみられる特徴であり、そのためTBL3は、リボソーム産生が細胞周期制御やプロテオスタシスとどのように結び付くかを研究するうえで有用な結節点となります。TBL3を含むリボソーム生合成因子では、発現量や依存性のパターンの変化が、がんなどタンパク質合成の制御異常を特徴とする疾患で観察されています。

TBL3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBL3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBL3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBL3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBL3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBL3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBL3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBL3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBL3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBL3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。