TBL1Y CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404389-ACT

TBL1Y は、NCoR/SMRT 転写コリプレッサー複合体の構成要素として機能する、Y 染色体連鎖の transducin β様タンパク質をコードしており、クロマチンに関連した抑制／活性化プログラムをシグナル依存的な遺伝子制御と結び付けるのに寄与します。ヒストン修飾酵素や転写因子との相互作用を介して、TBL1Y 関連複合体は RNA ポリメラーゼ II による転写、核内受容体シグナル伝達、ならびに発生過程における遺伝子発現ダイナミクスに影響を与えます。パラログである TBL1XR1 と比べると特徴付けは十分ではないものの、TBL1 ファミリータンパク質は一般に、細胞運命決定、炎症性シグナル、腫瘍性の転写リプログラミングを司る経路に広く関与すると考えられています。TBL1Y を研究することは、性染色体連鎖の制御ネットワーク、転写コレギュレーター生物学、そして疾患関連状況におけるクロマチン依存的な遺伝子発現異常の解明に資するものです。

TBL1Y CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TBL1Yの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

TBL1Y CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TBL1Y 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTBL1Y転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性TBL1Yの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTBL1Y遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるTBL1Y依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTBL1Y発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるTBL1Y経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。