TAZ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400320-ACT

WWTR1 codifica o coativador transcricional TAZ (TAFAZ), um efetor central da via de sinalização Hippo que integra contato célula–célula, estímulos mecânicos e polaridade a programas transcricionais que controlam proliferação, diferenciação e crescimento tecidual. Quando as quinases da via Hippo estão inativas, o TAZ se acumula no núcleo e coopera com fatores de transcrição da família TEAD para regular genes envolvidos na remodelação da matriz extracelular, na plasticidade epitélio–mesenquimal e em estados celulares semelhantes aos de células-tronco. A atividade aberrante de WWTR1/TAZ está associada a uma mecanotransdução desregulada e a alterações na especificação de linhagem em múltiplos contextos de doença, incluindo programas transcricionais associados ao câncer e remodelamento fibrótico. Essas características fazem do TAZ um alvo amplamente utilizado para estudar as saídas YAP/TAZ–TEAD, a comunicação cruzada com as vias Wnt e TGF-β e o controle transcricional dependente do contexto.

TAZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WWTR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAZ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WWTR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WWTR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAZ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WWTR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAZ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAZ em células tumorais com expressão de WWTR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.