TAL1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-423261-ACT

O Tal1 de camundongo (TAL1; proteína 1 da leucemia linfoblástica aguda de células T) codifica um fator de transcrição do tipo hélice–alça–hélice básico (bHLH) que se liga a motivos E-box e atua em complexos multiproteicos com fatores GATA, cofatores LMO e proteínas E para controlar a expressão gênica específica de linhagem. O TAL1 é um regulador-chave da especificação hematopoética e da maturação eritroide, moldando programas de comprometimento do destino celular, proliferação e diferenciação. Por meio do controle transcricional de redes hematopoéticas, o TAL1 integra sinais do desenvolvimento e a regulação da cromatina para manter o desenvolvimento adequado das células sanguíneas. A atividade desregulada de TAL1 está associada à hematopoiese aberrante e é amplamente estudada em modelos de circuitos transcricionais leucemogênicos e na biologia de células-tronco/progenitoras.

TAL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Tal1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAL1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Tal1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Tal1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAL1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Tal1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAL1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAL1 em células tumorais com expressão de Tal1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.