TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (m): sc-418985-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- TACE/ADAM17 Double-Nickase-Plasmid (m) und TACE/ADAM17 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Adam17 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
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| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
TACE/ADAM17 Double Nickase Plasmid (m) | sc-418985-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das Mausgen *Adam17* kodiert die transmembrane Metalloprotease TACE/ADAM17, eine zentrale Sheddase, die lösliche Ektodomänen von Zytokinen, Wachstumsfaktoren und Rezeptoren freisetzt. Durch die Spaltung von Substraten wie pro‑TNF, EGFR‑Liganden und ausgewählten Adhäsionsmolekülen verknüpft ADAM17 inflammatorische Signalgebung mit EGFR/MAPK‑ und NF‑κB‑assoziierten Signalwegen und prägt dadurch Zellkommunikation, Proliferation und Stressantworten. Seine Aktivität überschneidet sich mit regulierter intramembranärer Proteolyse sowie Membrantransportprozessen, die die Rezeptorverfügbarkeit und die Stärke nachgeschalteter Signale steuern. Eine fehlregulierte, ADAM17‑abhängige Shedding‑Aktivität wurde in experimentellen Modellen mit entzündlichen Erkrankungen, Gewebeumbau und krebsassoziierten Signalnetzwerken in Verbindung gebracht und motiviert mechanistische Studien in Immun‑ und Epithelsystemen.
TACE/ADAM17 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Adam17-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Adam17 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Adam17-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Adam17-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.