TAB3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404049-ACT

Humanes TAB3 (TAK1-bindendes Protein 3) ist eine Gerüst- und Regulationskomponente des TAB/TAK1-Signalmoduls, das vorgelagerte Rezeptor- und Stresssignale mit der Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege koppelt. Durch die koordinierte Assemblierung von Kinasekomplexen nachgeschaltet an Mustererkennungs- und Zytokin-Signalen trägt TAB3 dazu bei, Transkriptionsprogramme zu formen, die Entzündungsreaktionen, Zellüberleben und Stressanpassung steuern. Eine fehlregulierte Signalübertragung über TAK1-abhängige Netzwerke wird mit chronischen Entzündungen und onkogenen Signalkontexten in Verbindung gebracht, wodurch TAB3 für die Aufklärung der Verschaltung von Signalwegen und der Rückkopplungskontrolle relevant ist. Entsprechend werden Expression und Funktion von TAB3 häufig in Studien zur angeborenen Immunantwort, zum Cross-Talk der Signaltransduktion und zur stimulusabhängigen Transkriptionsregulation untersucht.

TAB3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen TAB3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

TAB3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des TAB3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der TAB3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen TAB3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native TAB3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von TAB3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des TAB3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem TAB3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.