TAB3 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404049-ACT

A TAB3 (proteína 3 de ligação a TAK1) humana é um componente de suporte (scaffold) e regulatório do módulo de sinalização TAB/TAK1 que conecta sinais de receptores a montante e estímulos de estresse à ativação das vias NF-κB e MAPK. Ao coordenar a montagem de complexos de quinases a jusante de receptores de reconhecimento de padrões e da sinalização por citocinas, a TAB3 ajuda a moldar programas transcricionais que controlam respostas inflamatórias, sobrevivência celular e adaptação ao estresse. A sinalização desregulada por redes dependentes de TAK1 tem sido implicada em inflamação crônica e em contextos de sinalização oncogênica, tornando a TAB3 relevante para dissecar a arquitetura das vias e o controle por retroalimentação. Assim, a expressão e a função de TAB3 são comumente investigadas em estudos de sinalização imune inata, comunicação cruzada (cross-talk) na transdução de sinais e regulação transcricional dependente de estímulos.

TAB3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de TAB3 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

TAB3 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus TAB3 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição TAB3, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de TAB3. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus TAB3 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de TAB3 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via TAB3 em células tumorais com expressão de TAB3 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.