T2R38 Double Nickaseプラスミド (h): sc-402279-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- T2R38 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- T2R38ダブルニカースプラスミド（h）およびT2R38ダブルニカースプラスミド（h2）は、TAS2R38を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
T2R38 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-402279-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
T2R38 Double Nickaseプラスミド (h2) | sc-402279-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ヒトTAS2R38は苦味受容体T2R38をコードしており、チオ尿素（thiourea）基を含む化合物を感知して、三量体Gタンパク質、セカンドメッセンジャーの調節、ならびに下流のMAPK応答性転写プログラムを介する典型的なGPCRシグナル伝達を開始することで最もよく知られているクラスA GPCRである。味覚にとどまらず、気道などの上皮におけるT2R38の発現は、線毛運動や抗菌シグナルに影響する経路を含む生体防御バリア応答の先天免疫的な制御に関わる化学感覚（ケモセンス）調節と関連づけられてきた。一般的なTAS2R38ハプロタイプは受容体応答性を変化させ、苦味知覚の個人差、食行動、ならびに宿主—環境相互作用との関連で研究されている。これらの特徴により、TAS2R38はGPCRのリガンド特異性、シグナル伝達ダイナミクス、そして遺伝子型依存的な表現型を解明するための有用なモデルとなっている。
T2R38 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における TAS2R38 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、TAS2R38内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、TAS2R38の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、TAS2R38が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。