Plásmido CRISPR de Activación (h) T1-cadherin: sc-401986-ACT

CDH9 codifica la T1-cadherina, una molécula de adhesión célula–célula dependiente de calcio de la superfamilia de las cadherinas, que contribuye al patrón tisular y al mantenimiento de las uniones intercelulares. Mediante unión homofílica y su vínculo con la organización del citoesqueleto, CDH9 influye en programas de polaridad celular, migración y crecimiento de neuritas que se entrecruzan con la señalización del desarrollo y el control del crecimiento mediado por contacto. Los perfiles alterados de expresión de cadherinas pueden desplazar el equilibrio entre adhesión y motilidad y remodelar los entornos locales de señalización, lo que convierte a CDH9 en un nodo útil para estudiar los mecanismos que subyacen a la invasión celular, la diferenciación y la formación de redes. En biología humana, la desregulación de CDH9 se ha examinado en contextos donde la adhesión y la conectividad están alteradas, incluidos procesos del neurodesarrollo y asociados al cáncer.

T1-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CDH9 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

T1-cadherin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CDH9 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CDH9, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de T1-cadherin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CDH9 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de T1-cadherin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía T1-cadherin en células tumorales con expresión de CDH9 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.