Syntaxin 8 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405269-ACT

STX8 codifica la sintassina 8, una proteina Q-SNARE che coordina l’aggancio delle vescicole e la fusione di membrana all’interno del sistema endosomiale. La sintassina 8 partecipa al traffico dagli endosomi alla rete trans-Golgi e al traffico endolisosomiale attraverso l’assemblaggio dei complessi SNARE, influenzando il riciclo dei recettori, lo smistamento del carico e la degradazione indirizzata ai lisosomi. Regolando la distribuzione e il turnover di recettori di segnalazione e trasportatori, STX8 influisce sull’omeostasi cellulare, sulla segnalazione immunitaria e sulle risposte allo stress legate al trasporto vescicolare. Alterazioni del traffico endosomiale e della funzione SNARE sono spesso implicate nella neurodegenerazione, nell’adattamento delle cellule tumorali e nella biologia delle malattie infettive, rendendo STX8 un nodo utile per studi orientati ai pathway sulla dinamica delle membrane.

Syntaxin 8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STX8 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Syntaxin 8 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STX8 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STX8, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Syntaxin 8. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STX8 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Syntaxin 8 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Syntaxin 8 nelle cellule tumorali con espressione di STX8 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.