Syntaxin 11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404809-ACT

O STX11 codifica a sintaxina 11, uma proteína t-SNARE que regula o acoplamento de vesículas e eventos de fusão de membranas, críticos para a exocitose regulada e o tráfego endossomal. Em células imunes, a sintaxina 11 sustenta a liberação de grânulos citotóxicos e contribui para a dinâmica coordenada de lisossomos secretórios que molda respostas antivirais e antitumorais. A interrupção da fusão de membranas dependente de STX11 desorganiza as vias de maturação dos grânulos e de degranulação, com relevância documentada para fenótipos de imunodeficiência primária envolvendo citotoxicidade linfocitária defeituosa. Como componente de redes de tráfego mediadas por SNARE, a sintaxina 11 também é utilizada para estudar identidade de organelas, ancoragem de vesículas e entrega de carga em contextos hematopoéticos e inflamatórios.

Syntaxin 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de STX11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Syntaxin 11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus STX11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição STX11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Syntaxin 11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus STX11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Syntaxin 11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Syntaxin 11 em células tumorais com expressão de STX11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.