Syne-2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403318-ACT

SYNE2 codifica a Syne-2 (nesprin-2), um componente central do complexo LINC que faz a ponte entre o envelope nuclear e o citoesqueleto de actina por meio de interações com proteínas SUN. Ao acoplar o núcleo às forças do citoesqueleto, a Syne-2 sustenta o posicionamento nuclear, a mecanotransdução, a polarização celular e a migração, além de contribuir para a manutenção da arquitetura nuclear durante a divisão e a diferenciação celulares. As vias dependentes de SYNE2 são frequentemente estudadas em contextos de remodelação do citoesqueleto e organização do genoma, sendo que alterações na função de nesprina estão implicadas em fenótipos neuromusculares e cardiomiopáticos, bem como em mudanças relacionadas ao câncer na morfologia nuclear e na invasividade. Essas características tornam o SYNE2 um alvo útil para investigar a regulação gênica dependente de forças e a integridade do envelope nuclear em modelos de células humanas.

Syne-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SYNE2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Syne-2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SYNE2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SYNE2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Syne-2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SYNE2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Syne-2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Syne-2 em células tumorais com expressão de SYNE2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.